ELISPOT 法源自 ELISA ，又突破传统 ELISA 法，是定量 ELISA 技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白，它们最大的不同在于：

• ELISA 通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。
• ELISPOT 也是通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过CTL公司的 ELISPOT 分析系统对斑点进行计数， 1 个斑点代表 1 个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。（某些研究不仅要测细胞因子生成量，还需检测分泌此细胞因子的细胞频率）
• 由于是单细胞水平检测， ELISPOT 比 ELISA 和有限稀释法等更灵敏，能从 20 万 -30 万细胞中检出 1 个分泌该蛋白的细胞。
• 捕获抗体为 BD 、 R&D 、 Mabtech 、 Diaclone 生产的高亲和力、高特异性、低内毒素单抗，在研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。
  

• 哪些斑点是抗原特异性 T 细胞产生的（此斑点具有进一步分析价值），哪些是无关细胞产生的（此斑点没有 T 细胞研究价值）
• 斑点大小的意义
• 在对不同细胞因子计数和分析时，如何定义斑点最大和最小尺寸
• 如何从单个细胞基础上分析
• 实验精确度有多高？如果一个细胞产生相似的细胞因子，在多大程度上会干扰分析结果？
• 几次重复实验才能使结果更有意义？
  

图注：ELISPOT法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生 IFN-? 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用 ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和 ELISA 法（下图）分别测量产生 IFN-? 的细胞的数目。

ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视化。这些分析异常敏感，因为它是在直接在分泌细胞的周围进行捕捉，而且是在表面被冲淡，或者被临近的细胞上的受体捕获，或降解之前。

• 最低至1：100万细胞精度的活体外频率测量。这种分辨率已经远远超过使用细胞内细胞因子的四聚物染色和 ELISA 法测量的精度。这种高敏感度是非常关键的，因为抗原特异性 T 细胞在体外都是典型性的低频率。
• 高产量 T 细胞分析成为可行。一个经过训练的相关实验室小组可以测试成百的样本中几十种抗原的反应。
• 只需要少量细胞，就可以用于通其他细胞学分析方法进行比较。例如，45毫升的血液就足以用于测试600种不同抗原/肽类物质的反应。
• 可以定义CD4和CD8细胞的免疫因子指标。这是因为只需要少数细胞，分析就可以在高产量模式下进行。ELISPOT 分析在筛选肽库，绘制免疫因子方面是一个理想的工具。
• 用于确定抗原特异性 T 细胞的功能性亲和力。这最大可能受到肽类药物刺激至50%的影响。
• 可以用于研究未经药物处理过的细胞的分泌过程。如果观察到净产量减少，可以确定这种区别是来自于分泌细胞的减少，还是每个细胞分泌产量的减少。
• 淋巴细胞在 ELISPOT 分析后依然存活。这使得分析之后进行增值，用于更进一步的分析、克隆或者低温储藏成为可能。
• 低温储藏后的人类淋巴细胞可以用于检测，而不会丢失其功能。治疗前和治疗后的样本可以并排进行测试，结果可以重复。
  

• 自身免疫检测、器官移植、疫苗和药品的研发与检测、 T 细胞功能研究、肿瘤研究、传染病的研究和检测、病毒研究等。
  

• 1. 单细胞解析度/体外抗原特异性 T 细胞频率的准确测量
  2. 测量 1 类和 2 类免疫力
  3. T 细胞的同源性细胞因子产物与旁细胞因子产物
  4. 功能性 T 细胞亲和力的测量
  5. 细胞因子协同表达 / 双色 ELISPOT
  6. 斑点尺寸分布
  7. 决定因素绘制 / 高通量审查
  8. PBMC的体外测量的分析到分析的重可生产性
  9. 新鲜和低温储藏后的人类PBMC的比较
  10. CD 8+ T 细胞和CD8+ T 细胞和 Granzyme B 的ELISPOT分析
  11. 除了人类 PBMC 、鼠淋巴结/脾脏细胞以外的细胞的 ELISPOT 分析
  12. 免疫与佐药
  13. 肿瘤免疫
  14. 移植免疫